hplc法测定山梨醇含量,没食子酸hplc法测定

作者：邓红,梁健健,张蜀,陆尚移

【摘要】 目的 建立加替沙星聚乳酸纳米粒的含量测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法，色谱柱为ODSC18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为0.02 mol/L枸橼酸溶液(内含0.6%三乙胺) 甲醇(体积比60∶40)，检测波长290 nm，流速 1.0 mL/min，进样量 20 μL。结果 加替沙星在4.010～60.15 μg/mL范围内浓度与峰面积线性关系良好(r=1.000)，平均回收率为100.2%，RSD为0.88%(n=9)。结论 建立的方法可用于加替沙星聚乳酸纳米粒的含量测定。

【关键词】 聚乳酸纳米粒；加替沙星；高效液相色谱法；含量测定

　　Abstract:Objective To establish a RPHPLC method for the determination of gatifloxacin in gatifloxacinpolylactic acid nanoparticles.Methods The analysis was performed on an ODSC18 column (150 mm×4.6 mm, 5 μm) using 0.02 mol/L citric acid (0.6% triethylamine)methanol (60∶40) as mobile phase under the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 290 nm.Results Gatifloxacin had a good linear range of 0.0802～1.2030 μg (r=1.000). The average recovery rate was 100.2% with RSD 0.88% (n=9) .Conclusion The method can be used to detect the content of gatifloxacin in the nanoparticles.

　　Key words:polylactic acid nanoparticles; gatifloxacin; HPLC

　　加替沙星(gatifloxacin)为第四代喹诺酮类抗菌药物，与现有喹诺酮类药物相比,加替沙星抗菌谱大,对G+细菌、衣原体、支原体、分枝杆菌和厌氧菌等都有强大的杀菌作用,通过8位引入甲氧基减轻了光毒性,是安全可靠的新一代氟喹诺酮类抗菌新药，临床上对上述病原体引起的各种感染治疗均有效。本课题研制的加替沙星聚乳酸纳米粒将制成关节腔埋植剂，用于治疗骨髓炎、减轻病人手术后剧痛。本文建立了测定加替沙星聚乳酸纳米粒含量的高效液相色谱法，为该埋植剂质量标准的进一步制订提供了实验数据。

　　1 仪器与试药
　　
　　Ultimate型液相色谱仪，PDA3000型检测器，CHROMELEON 色谱工作站（美国戴安公司）；CP225D电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；KQ100超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HWS24型电热恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司）。
　　
　　加替沙星聚乳酸纳米粒（由本研究所提供），加替沙星原料药(上虞京新药业有限公司，批号：0703301，质量分数99.5%），甲醇为色谱纯, 水为重蒸馏水，三乙胺和枸橼酸为分析纯。

　　2 实验部分

　　2.1 色谱条件

色谱柱：DiamonsilC18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm，迪马公司)；流动相：0.02 mol/L枸橼酸溶液(内含0.6%三乙胺)甲醇(体积比60∶40)；检测波长：290 nm，流速： 1.0 mL/min，柱温：室温，进样量：20 μL，理论塔板数按加替沙星计算大于2 000。

　　2.2 溶液的配制

　　2.2.1 对照品溶液的配制

　　取加替沙星对照品约20 mg，精密称定,置100 mL量瓶中，加0.02 mol/L枸橼酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（实际配得浓度为0.2005 mg/mL的贮备液），精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加0.02 mol/L枸橼酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

　　2.2.2 供试品溶液的配制

　　取加替沙星聚乳酸纳米粒样品适量，研细，精密称定（约相当于加替沙星1 mg），置50 mL量瓶，加0.02 mol/L枸橼酸溶液适 适量，超声振摇15 min使溶解，再加0.02 mol/L枸橼酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　2.2.3 空白辅料溶液的配制

　　按处方量称取辅料，照“2.2.2”项下方法制备，即得。

　　2.3 系统适用性试验

　　取上述的对照品溶液、供试品溶液及空白辅料溶液各20 μL进样，依法测定，记录色谱图（见图1）。可见，供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致，辅料对测定无干扰。

　　2.4 线性关系考察
　　
　　精密量取对照品贮备液适量于10 mL量瓶中加0.02 mol/L枸橼酸溶液稀释至刻度，配制成质量浓度分别为4.010、10.025、20.050、30.075、40.100、50.125、60.150 μg/mL的系列对照品溶液，分别进样20 μL，测定其峰面积，以对照品质量浓度（ρ/μg·mL-1）为横坐标,峰面积(A)为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为: A=1.5598ρ-0.0883（r=1.000）,结果表明在4.010～60.15 μg/mL范围内质量浓度与峰面积呈良好的线性关系。

　　2.5 回收率试验
　　
　　精密量取加替沙星对照品贮备液4.0、5.0、6.0 mL各3份，相应加入处方量辅料，分别置50 mL量瓶中,加入0.02 mol/L枸橼酸溶液适量，超声振摇15 min，再加0.02 mol/L枸橼酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过,分别取续滤液20 μL进样测定，记录色谱图。计算平均回收率为100.2%，RSD=0.88%，n=9，见表1。表1 加替沙星回收率试验结果（略）

　　2.6 精密度试验
　　
　　取供试品溶液，连续测定6次，记录峰面积，计算其RSD值为0.068%，表明精密度良好。

　　2.7 重复性试验
　　
　　取同批加替沙星聚乳酸纳米粒样品，按“2.2.2”项下方法制备6份供试品溶液，依法测定，记录色谱图，并计算含量，结果平均含量为3.290 mg/g，RSD为0.93%。表明本法重复性好。

　　2.8 稳定性试验
　　
　　取供试品溶液，于0、1、3、5、8、12、24 h各测定1次，记录峰面积，计算其RSD值。结果峰面积RSD=0.21%，表明供试液在24 h内稳定。

　　2.9 样品测定
　　
　　取3批自制样品，按“2.2.2”项下方法制备，依法测定，计算样品中加替沙星的含量，结果3个批号（080109、080110、080112）的样品的含量分别为4.271、3.578、3.556 mg/g。

　　3 讨 论

　　3.1 流动相的选择

参考文献［1-6］，曾采用甲醇三乙胺0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(调节pH3.5),0.02 mol/L 枸橼酸溶液甲醇,0.02 mol/L枸橼酸溶液乙腈为流动相，结果发现以0.02 mol/L枸橼酸溶液(内含0.6%三乙胺)甲醇(体积比60∶40) 为流动相，峰形对称，柱效最高。

　　3.2 溶剂的选择

　　参考文献［3］，曾用甲醇、0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液、0.02 mol/L枸橼酸缓冲液作为溶剂，结果显示，加替沙星甲醇溶液放置时间长时会析出结晶,后两种溶解介质制备的供试品溶液的测定结果基本一致，考虑到与流动相的一致性，选用0.02 mol/L枸橼酸缓冲液作为溶剂。（3.3 本文所建立的方法方便、准确、可靠，可用于加替沙星聚乳酸纳米粒中加替沙星的含量测定。

【参考文献】
　　［1］徐勤，秦雪莲，邓立冬，等.HPLC法测定加替沙星胶囊的含量［J］.药物分析杂志,2004,24(5):538-541.

　　［2］张先洲，陈晓莉，韩世平.RPHPLC法测定加替沙星血药浓度［J］.中国药师，2004，7（9）：715-716.

　　［3］王昌锭，符秀娟，林丽珍.HPLC法测定注射用加替沙星中加替沙星的含量［J］.广东药学院学报，2004，20（6）：623－624.

　　［4］缪玉山，蒋金元，倪桃，等.反相高效液相色谱法测定加替沙星胶囊中加替沙星及有关物质的含量［J］.中国现代应用药学杂志，2003，20（6）:503-505.

　　［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版二部［S］.北京：北京工业出版社，2005： 303-304.

　　［6］王晓玲，李玉兰，李东，等.高效液相色谱法测定加替沙星眼凝胶中加替沙星的含量［J］.医学导报，2005，24（7）：623-624.

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