作者：吕红，陈海齐，刘培洁，马安霓
【摘要】 目的 建立香连素片的质量控制标准。方法 采用薄层色谱法鉴别香连素片中的木香；采用高效液相色谱法测定香连素片中盐酸小檗碱的含量。结果 在薄层色谱中检出了木香；盐酸小檗碱的进样量在0.0378～0.378 μg范围内呈良好的线性关系（r＝0.999 7），平均回收率为101.49%，RSD为1.97％（n＝6）。结论 本方法专属性强、准确、重现性好，可作为香连素片的质量控制标准。
【关键词】 香连素片；木香；薄层色谱法；盐酸小檗碱；高效液相色谱法
Abstract:Objective To establish a method for quality control of Xiangliansu tablets. Methods Radix Auckiandiae in the tablets was identified by TLC. The content of berberine hydrochloride in the tablets was determined by HPLC. Results Radix Auckiandiae could be identified by TLC. Berberine hydrochloride showed a good linear correlation over the range of 0.0378-0.378 μg (r=0.999 7). The average recovery of berberine hydrochloride was 101.49% with RSD 1.97% (n=6). Conclutions The method is specific, accurate and reproducible for the equality control of Xiangliansu tablets.
Key words:Xiangliansu tablets；berberine hydrochloride；HPLC；Radix auckiandiae；TLC
香连素片是广东万年青制药有限公司的产品，具有清热燥湿、行气止痛的功效，临床用于湿热型痢疾、里急后重、腹痛泄泻。其处方为木香500 g、盐酸小檗碱75 g。原药品标准［1］鉴别木香用试管反应，盐酸小檗碱的含量用紫外分光光度法测定，方法专属性较低且影响因素多。本文采用薄层色谱法鉴别木香、高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量，结果表明操作简便、准确、重复性好，为该品种的质量标准进一步修订提供了依据。
1 仪器与试药
1.1 试药
香连素片（批号：030801、030802、030803、040701、041002、050601、050802、060601、060602、060603）均为广东万年青制药有限公司产品；木香对照药材（批号：921-9201）及盐酸小檗碱对照品（批号：110713-200609）均购自中国药品生物制品检验所；硅胶G预制板及硅胶G均由青岛海洋化工厂生产;乙腈为色谱纯;其他试剂与试药均为分析纯。
1.2 仪器
LC2010A高效液相色谱仪(日本岛津), UV2501PC紫外分光光度仪（日本岛津）, CQ15A超声波清洗器（上海跃进医用光学器材厂）。
2 薄层鉴别［2］ 取本品2片，研成细粉，加三氯甲烷10 mL，超声（功率120 W，频率50 Hz）处理30 min，滤过，滤液浓缩至2 mL，作为供试品溶液。另取木香对照药材0.2 g、不含木香的阴性样品，同法分别制成对照药材溶液及阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各3 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷环己烷（体积比5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点清晰。置可见光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰，见图1。
3 含量测定
3．1 色谱条件
色谱柱：phenomenex C18（150 mm×4.6 mm，5 μm） 流动相：以磷酸盐缓冲溶液［0.05 mol/L磷酸二氢钾和0.01 mol/L十二烷基磺酸钠（体积比1∶1），含0.2%三乙胺］乙腈（体积 积比60∶40），用磷酸调节pH值至3.0为流动相；流速：1.2 mL/min，检测波长：266 nm，柱温：室温，进样量：10 μL，理论塔板数不低于1500。
3．2 溶液的制备
3.2.1 对照品溶液的制备
取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1 mL含120 μg的溶液，作为对照品溶液。
3.2．2 供试品溶液的制备
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸小檗碱60 mg），置索氏提取器中，加盐酸甲醇（体积比1∶100）适量，加热回流提取至提取液无色，将提取液（必要时浓缩）移至50 mL量瓶中，用少量盐酸甲醇（1体积比∶100）的混合液洗涤容器，洗液并入提取液中，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。
3.2.3 阴性对照溶液的制备
按照本品的处方、制法制备缺少盐酸小檗碱的模拟样品，按“3.2.2”项方法制成阴性对照溶液。
3.3 专属性试验
分别取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，结果阴性对照对盐酸小檗碱测定无干扰，说明方法专属性强。结果见图2。
3.4 线性关系的考察
精?称取盐酸小檗碱对照品适量，用乙醇溶解制成质量浓度为37.8 μg/mL的溶液，分别精密吸取1、2、4、6、8、10 μL注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以进样量（m）为横坐标，色谱峰面积积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，得线性回归方程为Y=2.88725×106m-5586.84，r=0.999 7，表明盐酸小檗碱进样量在0.0378～0.378 μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。 3.5 稳定性试验
精密吸取同一批供试品溶液各10 μL，按上述色谱条件，每隔1 h测1次峰面积，结果表明盐酸小檗碱在24 h内稳定，RSD为0.66%。
3.6 重复性试验
取同一批样品共6份，分别按“3.2.2”项下方法进行制备溶液，并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，结果RSD=0.90%,表明方法重现性良好。
3.7 回收率试验
精密称取已知含量的样品（批号：030802）共6份，分别精密加入对照品适量，按“3.2.2”项下方法制备溶液并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，计算加入量的回收率。结果见表1。表1 盐酸小檗碱加样回收率试验（略）
3.8 准确度考察
以含量限度下限的50%为范围低限、以含量限度上限的150%为范围高限，考察测定范围的准确度。
精密称取已知含量的样品（批号：030802），按含量范围高、低限折算取样量，各6份，分别精密加入对照品适量，按“3.2.2”项下方法制备溶液并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，计算加入量的回收率。结果见表2。表2 准确度试验结果（略）
3.9 样品的测定 取10批样品，分别按“3.2.2”项下方法制备溶液，分别精密量取供试品溶液及对照品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，并按上述色谱条件，测定盐酸小檗碱的含量，结果见表3 。表3 样品中盐酸小檗碱的含量（略）
4 讨 论
4.1 采用薄层色谱法鉴别木香时,分别采用自制板及预制板同时展开、预平衡与未平衡的条件展开，层析结果表明：自制板与预制板的层析结果无差别，两种展开条件均可检出木香特征斑点，但以未平衡的条件展开，结果容易产生边缘效应，故展开时预平衡10 min较好。
4.2 薄层层析的环境影响
分别在冰箱、室温、相对湿度45%和75%的环境条件下展开，结果表明：在上述环境条件展开，均可检出木香特征斑点，差异不大，故选用以室温、相对湿度45%～75%为展开环境条件，操作简便。
4.3 提取方法的选择
参照国家药品标准［1］，供试品溶液的制备是经索氏提取后上氧化铝柱洗脱，操作较繁琐。我们对提取方法进行了优化，只经索氏提取后直接测定，并与原提取方法的HPLC测定结果作对比。结果表明：只经索氏提取与原提取方法的测定结果一致，因此样品的提取采用索氏提取法。
4.4 测定波长的选择
取对照品溶液， 在200～500 nm波长范围内进行扫描，在349、266、231 nm均有最大吸收，经 HPLC试验比较，盐酸小檗碱在266 nm波长的峰面积值最大，故选择检测波长为266 nm。
4.5 流动相的选择
参考文献［3,4］，采用磷酸盐缓冲溶液［0.05 mol/L磷酸二氢钾和0.01 mol/L十二烷基磺酸钠（1∶1），含0.2%三乙胺］乙腈（60∶40）,分别用磷酸调节pH值至3.0、3.2、3.5为流动相，经试验，当流动相的pH值为3.0时对照品及样品的峰形对称，重复性好，阴性对照无干扰，故确定流动相为磷酸盐缓冲溶液［0.05 mol/L磷酸二氢钾和0.01 mol/L十二烷基磺酸钠（1∶1），含0.2%三乙胺］乙腈（60∶40），用磷酸调节pH值至3.0。
4.6 耐用性考察
4.6.1 柱温的考察
柱温分别为室温、40 ℃时，色谱峰的分离度、峰形及峰面积基本一致，故以室温作为柱温，操作较简便。
4.6.2 流速的考察
分别设定流速为1.0、1.2及1.5 mL/min进行测定，结果表明：当流速为1.0 mL/min时保留时间太长，当流速分别为1.2及1.5mL/min时色谱峰的峰形及峰面积无甚差别，且前者的保留时间短一些，故选择流速为1.2 mL/min。
4.6.3 色谱柱的考察
选用3种不同厂牌的色谱柱：phenomenex C18 (150 mm×4.60 mm,5 μm)、DiamonsilTM C18 (250 mm×4.60 mm,5 μm)和 Spherisorb C18 (250 mm×4.60 mm,5 μm)，测定同一批样品（批号：060602）的含量，结果3种色谱柱测得含量的RSD=0.61%（n=2），表明换用不同厂牌的色谱柱，均可得到满意的色谱图，故本法的耐用性好。
【参考文献】 ［1］WS3—B—2572—97.国家药品标准:卫生部药品标准第十三册［S］.1997:140.
［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版一部［S］.北京：化学工业出版社，2005：41.
［3］庞小雄，宋粉云，钟兆健，等.HPLC法测定拈痛丸中盐酸小檗碱的含量［J］.广东药学院学报，2007,23(3):240-242.
［4］张宇烽，马安霓，陈小玲，等.HPLC法测定芩连葛根片盐酸小檗碱的含量［J］.广东药学，2004，14（7）：83.
论文出处(作者):
http://m.tuzhexing.com/peixun/429404/