作者：巫世红 蒋伟哲 黄敏 黄增琼 苏桂良
【摘要】 目的考察与确定猫豆的最佳采收季节。方法采用高效液相色谱法测定不同成熟时期猫豆中左旋多巴的含量。以Phenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)为色谱柱，流动相为0.1 mol?L-1冰醋酸溶液∶甲醇(95∶5)；流速1.0 ml?min-1；检测波长280 nm；柱温25℃。结果5种不同成熟时期猫豆中左旋多巴的含量在3.47%～6.55%之间。结论干枯期采收的猫豆左旋多巴含量最高(6.55%)，是猫豆的最佳采收时期。论文论文参考网
【关键词】 猫豆 左旋多巴 高效液相色谱法
猫豆又名狗爪豆，是豆科黎豆属植物龙爪黎豆Stizolobium cochinchinensis (Lour) Tang et Wang的种子，种皮灰白色。本属植物适合在我国亚热带地区生长。猫豆在广西种植已具有一定规模，成为广西特色的经济作物，其主要有效成分是左旋多巴。左旋多巴主要用于治疗震颤麻痹、肝昏迷等［1］。以猫豆提取左旋多巴在广西已经实现工业化大生产，并建立了规范化的种植基地。为了考察与确定猫豆最佳采收时期，我们采集了同一产地不同成熟期的5个样品，采用高效液相色谱法分别测定其中左旋多巴的含量。现报道如下。
1 材料
威玛龙LC-9000D高效液相色谱仪（广西省南宁市威玛龙色谱科技有限公司）；SG3300H超声波清洗器（上海冠特超声仪器有限公司）； BS100s电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。左旋多巴对照品（中国药品生物制品检定所，批号100170)；甲醇（色谱纯 批号：061100 10），其他试剂为分析纯；水为蒸馏水。
根据猫豆不同成熟时期采集样品，由嫩到老，采集到5种同一产地不同成熟时期的样品见表1。
表1 不同采收时期猫豆样品归属（略）
以上样品均是2007年采集于广西壮族自治区龙州县猫豆规范化种植基地并经广西中医药研究院植物分类学专家赖茂祥研究员鉴定为豆科黎豆属植物龙爪黎豆Mucuna pruriens var.utilis的种子。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Phenomenex C18柱(250 mm×4.60 mm，5 μm)；流动相为0.1 mol?L-1冰醋酸溶液∶甲醇 (95∶5)；流速1 ml?min-1；检测波长280 nm；进样量20 μl; 柱温25℃。在此条件下，左旋多巴能达到理想的分离效果，保留时间为4.6min，理论塔板数以左旋多巴峰计不低于2 000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品（贮备）溶液的制备 取经105℃干燥至恒重的左旋多巴对照品适量，精密称定，加入0.1 mol?L-1 HCl溶液溶解并稀释制成每毫升中含0.529 mg左旋多巴的对照品溶液，作为贮备液。
2.2.2 样品溶液的制备 取经105℃干燥至恒重5种不同采收时期的猫豆捣碎研成细粉，各取粉末约0.4 g，精密称定，分别置于50 ml容量瓶中，加入0.1 mol?L-1 HCl溶液振摇后冷浸24 h，定容至刻度，滤过，取续滤液2.5 ml置于10 ml量瓶中, 加入0.1 mol?L-1 HCl溶液，稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 空白溶液制备 取0.1 mol?L-1 HCl溶液10ml，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
2.3 系统适应性试验及专属性考察按照“2.1”项下色谱条件，分别量取“2.2.1”“2.2.2”及“2.2.3”项下溶液各20 μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，详见图1。结果，对照品与样品溶液主峰的保留时间一致，空白溶液在左旋多巴相应位置处无色谱峰出现，不干扰左旋多巴的含量测定。理论塔板数以左旋多巴峰计算不低于2 000。
图1 高效液相色谱图（略）
2.4 线性关系和线性范围实验分别精密量取“2.2.1”项下的对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml，用0.1 mol?L-1 HCl溶液定容至10ml，摇匀，制成浓度为26.45，52.90，79.35，105.8，132.25 μg?ml-1的一系列对照品溶液,然后依法操作，分别进样20μl，记录峰面积。以对照品进样浓度(X)为横坐标，吸收峰面积积分值（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：Y=12 817X-7 702.1，r=0.999 15,（n=5)。结果表明，左旋多 多巴进样浓度在26.45～132.25 μg?ml-1范围内，与其峰面积积分值之间呈良好的线性关系。
2.5 精密度实验取“2.2.1”项下的对照品溶液20μl，在上述色谱条件下，连续进样5次,记录色谱峰面积，根据峰面积值计算出RSD值为1.17%，结果表明，仪器精密度良好。
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2.6 稳定性实验称取干枯期的猫豆样品粉末适量，精密称定，按“2.2.2”项下的方法制备成样品溶液，于室温下放置，分别在不同的时间点0，2，4, 6，12h各进样20μl，记录色谱峰面积。结果表明，样品溶液在常温下12 h内稳定性良好（RSD为1.31%）。
2.7 重复性实验 取已知含量干枯期的猫豆样品粉末约0.4 g，各6份，精密称定，按“2.2.2”项下的方法制备成样品溶液，按“2.1”项下的色谱条件分别进行测定，考察方法重现性，RSD为0.81%，测得平均含量为6.48%，结果表明方法重复性良好。
2.8 回收率实验取左旋多巴对照品适量，精密称定，置于50 ml容量瓶中,按“2.2.1”项下的方法制成每毫升中含4.018 4 mg左旋多巴的对照品溶液。
取已知左旋多巴含量（6.55％）的干枯期猫豆样品粉末约0.25，0.30，0.36 g各2份，精密称定，分别置于50ml容量瓶中，精密加入新制的左旋多巴对照品溶液5.0 ml，加入0.1 mol?L-1 HCl溶液振摇后冷浸24 h，定容至刻度，滤过。取续滤液5 ml置于50 ml容量瓶中，用0.1 mol?l-1 HCl溶液稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过。分别取续滤液20μl，注入高效液相色谱仪分别进行测定，记录峰面积，计算回收率。结果见表2。
表2 加样回收率实验结果（略）
2.9 样品含量测定取左旋多巴对照品约0.01 g和5种不同采收时期的猫豆样品粉末约0.4 g，按“2.2”项下的方法分别制备对照品溶液和样品溶液，按上述色谱条件分别进行测定，根据峰面积值计算其含量，即得。结果表明干枯期的猫豆中左旋多巴含量最高。见表3。
表3 不同采收时期猫豆药材中左旋多巴的含量测定结果（略）
3 讨论
根据左旋多巴在水中微溶，在稀酸和乙醇中易溶，碱性条件下易分解的性质，我们设计用稀酸提取，不但能保证左旋多巴的提取率和稳定性，水溶性杂质对测定无干扰；而且此提取方法也避免了使用乙醇等有机溶剂［2，3］，冷浸24 h以后提取基本完全［3］，该左旋多巴测定方法简便，经济，可行。
以前研究了不同种类及不同产地的猫豆品质，本研究考察了不同采收时间的猫豆品质，根据左旋多巴的性质，猫豆也有可能因保存方法、贮藏条件、贮藏时间等的不同而影响其含量，有待进一步研究。
【参考文献】
［1］ 陈新谦，金有豫. 新编药物学，第15版［M］.北京:人民卫生出版社， 2004：165.
［2］ 蒋伟哲，周燕文，吴 闯，等. 不同产地猫豆中左旋多巴的含量比较［J］.中草药，2000，31(11)：860.
［3］ 黄海滨，许学健，奉建芳. 高效液相色谱法测定猫豆中左旋多巴的含量［J］. 广西植物，1994，14(3)：293.
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