作者：杨宏图，宋玲玲，常翠，饶曼妮，刘艳，黄凤如，徐群英
【摘要】 目的 研究五味子宁神口服液对衰老模型小鼠的影响,从氧自由基代谢方面初步探讨其抗衰老的作用机制。方法采用D-半乳糖致亚急性衰老小鼠模型,测定小鼠肝脏、脑组织中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,丙二醛(MDA)的含量,脑组织中单胺氧化酶(MAO)的活性,以及胸腺指数和脾脏指数。结果五味子宁神口服液可明显降低D-半乳糖衰老小鼠肝脏和脑组织中过高的MDA含量,上调其过低的抗氧化酶SOD,GSH-PX活性,降低脑组织中的MAO活性,提高胸腺、脾脏指数。结论五味子宁神口服液可通过增强机体清除氧自由基能力,提高抗氧化酶活性而发挥抗衰老作用。
【关键词】 五味子宁神口服液; 衰老; 超氧化物歧化酶; 丙二醛; 谷胱甘肽过氧化物酶; 单胺氧化酶
Abstract:Objective To investigate the anti-aging effect of Wuweizi Ningshen Oral Liquid. MethodsSubacute aging model in mice was established by D-galactose (D-gal) and activities of SOD and GSH-PX, content of MDA in brain and liver tissues, activity of MAO in brain tissue and immune indexes were determined. ResultsWuweizi Ningshen Oral Liquid markedly increased the activities of SOD and GSH-PX, significantly decreased the content of MDA in brain and liver tissues. MAO activities in brain tissue was also decreased. It also elevated the spleen and thymus indexes. ConclusionWuweizi Ningshen Oral Liquid might have anti-aging effect, which is implemented by eliminating oxyen free radicals, increasing activities of antioxidases.
Key words:Wuweizi Ningshen Oral Liquid; Aging; SOD; MDA; GSH-PX; MAO
五味子宁神口服液［1,2］由五味子、党参、黄芪等5味中药组成，主要用于治疗病后神经衰弱、体弱多病、失眠等症，是在临床应用多年的医院制剂，疗效显著，无毒副作用。论文论文参考网对五味子宁神口服液抗衰老作用的研究未见报道。本研究采用D-半乳糖所致衰老小鼠模型,从氧自由基代谢方面研究五味子宁神口服液的抗衰老作用，探讨治疗体弱多病的可能作用机制。
1 材料与仪器
1.1 动物
昆明种小鼠，体重（20±2）g，雌雄各半，由广州中医药大学动物实验中心提供，合格证号：粤监证字2005A027。
1.2 药品与试剂
五味子宁神口服液（深圳市人民医院自制，批号061130）；D-半乳糖(北京化学试剂公司,批号20060718)；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、单胺氧化酶(MAO)和丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
1.3 仪器DU640
紫外分光光度计(BECKMAN), BEPⅢ自动酶免疫分析仪(德国DADE BEHRING)，5810R 冷冻高速离心机(Centrifuge),GF-1型内切式匀浆器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)。
2 方法
2.1 D-半乳糖致衰老小鼠模型的建立［3］及动物分组
取健康昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、维生素E组及五味子宁神口服液低、中、高3个剂量组。正常组皮下注射灭菌生理盐水;模型组皮下注射D-半乳糖(120 mg/kg);给药组灌胃给予五味子宁神口服液(12.8,25.6,51.4 g/kg),同时皮下注射D-半乳糖(120 mg/kg )；阳性药组灌胃给予维生素E50 mg/kg g,同时皮下注射D-半乳糖(120 mg/kg )。模型组连续给D-半乳糖6周后,小鼠行动迟缓,毛色灰暗,形体瘦弱,呈现明显的衰老体征。于末次给药2 h后处死小鼠,取小鼠脑、肝脏组织制备组织匀浆测定SOD，GSH-PX，MAO，MDA等衰老生化指标;取胸腺、脾脏称重,计算脏器指数。
2.2 测定方法
SOD活性测定采用邻苯三酚自氧化法，MDA含量测定采用TBA反应比色法，GSH-PX活性测定,采用DTNB法，MAO活性测定采用紫外吸收光度法，蛋白质含量采用考马斯亮蓝法测定。具体操作均按测试盒所附方法、步骤进行。脏器指数(mg/g)=脏器重/小鼠体重
2.3 统计学处理
实验数据用±s表示,统计方法为方差分析,数据分析采用SPSS12.0统计软件包处理。
论文参考网
3 结果
3.1 对小鼠肝组织SOD,MDA,GSH-PX的影响
与正常组小鼠比较,D-半乳糖致衰老模型小鼠肝脏组织中SOD,GSH-PX活力显著降低(P<0.01),MDA含量显著升高(P<0.01) MAO活力显著升高(P<0.01)。与模型组小鼠比较,五味子宁神口服液低、中、高剂量组小鼠肝脏组织中MDA含量均显著降低(P<0.01)，MAO活力显著降低(P<0.01);五味子宁神口服液中、高剂量组能明显增高肝脏SOD活力(P<0.05)；表明五味子宁神口服液能显著增高衰老小鼠肝脏中SOD,GSH-PX活力和?低MDA含量。结果见表1。表1 五味子宁神口服液对小鼠肝组织SOD，MDA，GSH-PX的影响 (略)
3.2 对小鼠脑组织SOD,MDA,GSH-PX,MAO的影响
与正常组小鼠比较,D-半乳糖致衰老模型小鼠脑组织中SOD，GSH-PX活力显著降低(P<0.01),MDA含量显著升高(P<0.01),MAO活性显著增高(P<0.01)。与模型组小鼠比较,五味子宁神口服液低、中、高剂量组小鼠脑组织中MDA含量均显著降低(P<0.01)，MAO活性均显著降低(P<0.01)，中、高剂量组小鼠脑组织中SOD，GSH-PX活力显著升高(P<0.01)。表明五味子宁神口服液能显著增高衰老小鼠脑中SOD，GSH-PX活力，降低MDA含量和MAO活性。结果见表2。表2 五味子宁神口服液对小鼠脑组织SOD，MDA，GSH-PX，MAO的影响(略)
3.3 对小鼠胸腺、脾脏指数的影响
与正常组小鼠比较,D-半乳糖致衰老模型小鼠胸腺指数(P<0.05)和脾脏指数(P<0.01)均显著下降。与模型组比较,五味子宁神口服液低、中剂量组小鼠胸腺指数显著增高(P<0.05),高剂量组小鼠胸腺指数也有增高,但无统计学差异;五味子宁神口服液低、中、高剂量组小鼠脾脏指数均增高,其中高剂量组增高显著(P<0.05)。表明五味子宁神口服液能增高衰老小鼠胸腺、脾脏指数。结果见表3。表3 五味子宁神口服液对小鼠胸腺、脾脏指数的影响 (略)
4 讨论
衰老的自由基学说认为,人体随着年龄增长所发生的退行性变化是细胞正常代谢过程中所产生的过量自由基副作用的结果。自由基过多可氧化不饱和脂肪酸,生成脂质过氧化物,损害生物膜,自由基还使DNA,RNA蛋白质变性,导致细胞正常生理活动受损引起衰老［4～6］。机体自身存在抗氧化系统,包括GSH-PX,SOD等抗氧化酶,相互协调来清除自由基,减少脂质过氧化物的产生。
本研究采用的D-半乳糖致衰老动物模型对自由基损伤和免疫指标的变化与人体衰老指标改变规律相似［7］。结果显示五味子宁神口服液能明显提高D-半乳糖致衰老小鼠肝脏和脑组织中SOD和GSH-PX活性,抑制自由基的脂质过氧化反应,降低脂质代谢产物的水平,提示五味子宁神口服液可能是通过提高机体抗氧化能力,清除衰老机体产生过多的自由基,抑制机体、组织、细胞的过氧化过程而起到延缓衰老的作用。
脑组织中单胺氧化酶(MAO)存在两种亚型,有研究表明45岁后人脑中MAO-B活性急剧上升,并随年龄增加而升高,引起脑组织儿茶酚胺含量紊乱和不足,致使神经系统和心血管系统等生理功能失调,导致细胞老化、机体衰老和老年性疾病的发生［8］。本研究结果显示,模型组小鼠脑组织中MAO活性明显高于对照组,五味子宁神口服液治疗组可明显抑制D-半乳糖致衰老小鼠脑组织中MAO活性的升高,而活性下降有利于保持神经系统的正常功能,对机体的抗氧化及抗衰老有促进作用。五味子宁神口服液能增高D-半乳糖衰老小鼠胸腺指数及脾脏指数,提示其亦有可能通过加强机体的免疫功能而延缓衰老
,具体作用有待于进一步实验来证实。
综上,五味子宁神口服液具有一定的抗衰老作用,其抗衰老机制可能是通过提高机体抗氧化能力,清除衰老机体产生的过多自由基,抑制机体、组织、细胞的脂质过氧化过程,而起到延缓衰老的作用。
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http://m.tuzhexing.com/kaoshi/360910/