作者：卢滨 范云双 万定荣 段宏泉
【摘要】 目的研究绿升麻中菠萝蜜烷型三萜皂苷类化学成分。方法以硅胶柱层析、凝胶层析等多种柱层析分离，制备高效液相色谱纯化，得到单体化合物，以各种有机波谱鉴定化合物结构。结果分离得到15个菠萝蜜烷型三萜类皂苷化合物，鉴定为asiaticoside A (1)；asiaticoside B (2)；26-deoxycimicifugoside(3)；cimicifugoside(23S,4)；25-甲氧基升麻醇-3-O-b-D-木糖苷(25- O-methyl-cimigenol-3-O- b-D-xylopyranoside,5)；25, 2′-二乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(25,2′-O-diacetylcimigenol-3-O-β-D-xylopyranoside,6)；24-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(24-O-acetylshengmanol-3-O-β-D-xylopyranoside(23R,24R,7)；24-O-acetyldahurinol-3-O-β-D-xylopyranoside(8)；23-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(23-O-acetylshengmanol-3-O-β-D-xylopyranoside,9)； Cimiracemoside M (10)；12β-acetoxy-3β-hydroxy-24,25,26,27-tetranor-cycloart-7-en-23,16β-olide-3-O-β-D-xylopyranoide(11)；12β-acetoxy-3β-hydroxy-24,25,26,27-tetranor-cycloartan-23,16β-olide-3-O-β-D-xylopyranoide(12)；Cimiracemoside H（13）；Neocimicigenosides B(14) ；2′-O-乙酰基-25-脱水升麻醇-3-O-β-D-木糖苷 (2′-O-acetyl-25-anhydrocimigenol-3-O-β-D-xylopyranoside, 15)。结论菠萝蜜烷型三萜类皂苷化合物3～15均为首次从绿升麻中分离得到。
【关键词】 绿升麻； 醋酸乙酯提取物； 菠萝蜜烷型三萜皂苷
Abstract：ObjectiveTo isolate and elucidate the constituents of Actaea asiatiea. MethodsChemical constituents were isolated by repeated column chromatography (Toyopearl HW-40C and preparative HPLC) and their structures were elucidated on the basis of spectral data analysis.ResultsFifteen cycloartane triterpenes were isolated from Actaea asiatiea，asiaticoside A, asiaticoside B, 26-deoxycimicifugoside,Cimicifugoside(23S),25-O-methyl-cimigenol-3-O- β-D-xylopyranoside,25,2′-O-diacetylcimigenol-3-O-β-D-xylopyranoside,24-O-acetylshengmanol-3-O-β-D-xylopyranoside(23R,24R),24-O-acetyldahurinol-3-O-β-D-xylopyranoside,23-O-acetylshengmanol-3-O-β-D-xylopyranoside,CimiracemosideM,12β-acetoxy-3β-hydroxy-24,25,26,27-tetranor-cycloart-7-en-23,16β-olide-3-O-β-D-xylopyranoside,12β-acetoxy-3β-hydroxy-24,25,26,27-tetranor-cycloartan-23,16β-olide-3- O-β-D-xylopyranoside, Cimiracemoside H, Neocimicigenosides B, 2′-O-acetyl-25-anhydrocimigenol-3-O-β-D-xylopyranoside. ConclusionCompound 3～15 were first isolated from Actaea asiatiea.
Key words：Actaea asiatiea; Ethyl acetated extraction; Cycloartane triterpenes
绿升麻为湖北省土家族传统药物，应用历史悠久，为毛茛科植物类叶升麻Actaea asiatiea Hara的根茎，主要分布在我国东北、内蒙古、河北、山西、陕西、甘肃、青海、湖北、四川、云南以及西藏东部。论文论文参考网绿升麻味辛、微苦，性平，具有散风热、祛风湿、透疹、解毒的作用，在湖北省鄂西地区土家族民间用于治疗风热头痛，咽喉肿痛、风湿疼痛、风疹块、麻疹不透、百日咳、子宫脱垂、犬咬伤等［1，2］。本文运用各种色谱分析手段，结合制备高效液相色谱，从绿升麻的醋酸乙酯提取物中分离得到15个菠萝蜜烷型三萜皂苷类化合物，通过各种有机波谱解析鉴定了各单体化合物的结构。
1 器材
核磁共振仪: Bruker AVANCE 300 instrument（TMS内标）; 制备高效液相色谱仪：日本分光公司（JASCO）, PU-1580 (泵), RI-1530 和 UV-1575（检测器）；制备色谱柱：YMC-Pack ODS-A SH-343-5 20X250mm（YMC），Econosphere silica 10μm 22 X250mm (Alltech); 液质联用色谱仪：Alliance 2695, Quattro Micro TM ESI (Waters); Toyopearl HW-40C（Tosoh, 凝胶渗透层析）；柱色谱和薄层色谱用硅胶均系青岛海洋化工厂生产，所用试剂均为分析纯。
绿升麻Actaea asiatiea Hara 2004??09采自湖北省鹤峰县，由中南民族大学生命科学院万定荣教授鉴定，标本（D20040901）存放于天津医科大学药学院。
2 提取分离
绿升麻2.6 kg，粉碎后用95%的乙醇加热回流提取3次，6 h/次。提取液减压浓缩至浸膏600 g，浸膏加水混悬后，分别用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇进行萃取，得石油醚提取物41 g，醋酸乙酯提取物210 g，正丁醇提取物31g。醋酸乙酯提取物经硅胶柱层析分离，大孔吸附树脂分离，制备高效液相色谱纯化得到化合物1～5；经凝胶渗透色谱，制备高效液相色谱纯化得到6～15。
3 结构鉴定
化合物1：白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 667 ［M+Na］+ (分子式 C37H56O9)。1H-NMR ( 300 MHz, Pyr ) δ: 0.21, 0.62(each 1H, d, J= 4.0 Hz, 19-H), 0.91, 1.04, 1.14， 1.17， 1.19， 1.24, 1.30 (each 3H , s，7×CH3), 2.15(3H, s, COCH3 ), 4.82 (2H, d, J=2.8Hz), 6.25(2H, d, J=7.3Hz, 1′-H)。13C-NMR数据见表1。化合物1经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［3］报道的数据基本一致，鉴定化合物为asiaticoside A。
化合物2：白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 665 ［M+Na］+(分子式C37H54O9 )。1H-NMR ( 300 MHz, Pyr ) δ: 0.50, 0.95 (each 1H, d, J =3.6Hz,19-H)， 1.04, 1.10, 1.10, 1.14, 1.16, 1.27, 1.36, ( 3H, s,7×CH3), 2.20（3H，s, COCH3）, 4.86(1H, d, J =7.1Hz,11′-H),5.19(1H, d, J =6.6Hz,7-H), 5.41(1H，d,J =9.0Hz，12-H)，6.25（1H, s, 22-H）。13C-NMR数据见表1。化合物2经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［3］报道的数据基本一致，鉴定化合物为asiaticoside B。
化合物3：无色针晶。ESI-MS m/z: 658 ［M+Na］+( 分子式 C37H54O10)。1H-NMR (300 MHz, Pyr ) δ: 0.52，1.06 (each 1H, d, J =4.0Hz , 19-H)，1.02( 3H, d, J = 6.0 Hz, 21-H), 1.05(3H, s )，1.17(
3H, s), 1.47(3H, s), 1.49(3H, s),1.32(3H,s), 3.74(1H,s,24-H) 。13C-NMR数据见表1。化合物3经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［4］报道的数据基本一致鉴定化合物为26-deoxycimicifugoside。
化合物4：白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 659 ［M+H］+( 分子式 C37H54O10)。1H-NMR ( 300 MHz , Pyr ) δ: 0.57, 1.09(each 1H, d, J =3.6Hz, 19-H)，0.95( 3H, d, J =5.6 Hz, 21-H), 1.02, 1.02, 1.33, 1.42, 1.80 (each 3H, s, 5×CH3), 2.20 (3H, s, COCH3), 2.95(1H, dd, J =16.0, 9.0Hz, 11H), 3.45(1H, dd, J =11.5, 3.8Hz, 3-H)，3.94 (1H，s，24－H)，4.72 (1H, q－like, J = 7.2Hz, 16-H)，4.85 (1H, d, J = 8.5 Hz, 11′-H)，5.07(1H, d, J =6.4 Hz, 7-H)，5.23 (1H, d, J =8.7 Hz, 12-H), 5.76 (1H，s, 27-H)。13C-NMR数据见表1。化合物4经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［5］报道的数据基本一致，鉴定化合物为Cimicifugoside(23S,4)。
化合物5：白色无定型粉末。ESI-MS m/z:637［M+H］+ (分子式C36H58O9)。1H-NMR ( Pyr ) δ: 0.30, 0.56(each 1H, d, J = 3.8Hz, 19-H)； 0.85 (3H, d, J = 6.2 Hz, 21-H)； 1.08, 1.16, 1.20, 1.27, 1.27, 1.34 (each 3H, s, 6×CH3), 3.21 (3H, s, COCH3), 3.53 ( 1H, dd, J = 12.0, 4.0 Hz, 3-H), 3.66 (1H, br s, 24-H), 4.26 (1H, s, 15-H), 4.63 (1H, br d, J =9.0 Hz, 23-H), 4.88 (1H, d, J = 7.3 Hz, 1′-H)。13C-NMR数据见表1。化合物5经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［6］报道的数据基本一致，鉴定化合物为25-甲氧基升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(25- O-methyl-cimigenol-3-O- β-D-xylopyranoside,5)。
化合物 6：白色无定型粉末。ESI-MS m/z:705［M+H］+ (分子式C39H60O11)。1H-NMR ( Pyr ) δ: 0.26, 0.50(each 1H, d, J = 3.8Hz, 19-H), 0.87 (3H, d, J = 6.3 Hz, 21-H), 0.99, 1.11, 1.16, 1.20, 1.68, 1.70 (each 3H, s，6×CH3), 1.98, 2.17 (each 3H, s, 2×Ac), 3.40 (1H, dd, J= 12.0, 4.0 Hz, 3-H), 4.13 (1H, br s, 24-H), 4.30 (1H, s, 15-H), 4.61 (1H, br d, J=9.0 Hz, 23-H), 4.83 (1H, d, J= 8.0 Hz, 1′-H), 5.56 (1H, t, J= 8.0 Hz, 3′-H)。13C-NMR数据见表1。化合物6经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［7］报道的数据基本一致，鉴定化合物为25,2′-二乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(25,2′-O-diacetylcimigenol-3-O-β-D-xylopyranoside)。
论文参考网 化合物7：白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 681 ［M+H］+(分子式C37H60O11)。1H-NMR ( Pyr ) δ: 0.29, 0.58 (each 1H, d, J= 3.6 Hz, 19-H), 0.97 (3H, d, J= 5.9 Hz, 21-H), 1.07, 1.20, 1.23, 1.33, 1.48, 1.52 (each 3H, s，6×CH3), 2.13
(3H, s, Ac), 3.50(1H, dd, J= 11.5, 4.0, 3-H), 4.17 (1H, s, 15-H), 4.90 (1H, d,J=7.4 Hz, 1′-H), 5.78 (1H, d, J= 8.0 Hz, 24-H)。13C-NMR数据见表1。化合物7经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［4］报道的数据基本一致，鉴定化合物为24-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(24-O-acetylshengmanol-3-O-β-D-xylopyranoside (23R,24R) )。
化合物8：白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 664 ［M+H］+(分子式C37H58O10)。1H-NMR ( Pyr ) δ: 0.28, 0.51 (each 1H, d, J= 3.6 Hz, 19-H), 0.95 (3H, d, J= 6.0 Hz, 21-H), 1.05, 1.09, 1.19, 1.33, 1.51, 1.51 (each 3H, s，6×CH3), 2.12 (3H, s, Ac), 3.53(dd, J = 11.0, 3.6 Hz, 3-H), 3.85(1H, d, J= 12.5 Hz, 16-H), 4.22(m), 4.38 (1H, dd, J= 11.3, 5.0 Hz, 5′-H), 4.88 (1H, d, J = 7.4 Hz, 1′-H), 5.42 (1H, d, J = 6.0 Hz, 24-H)。13C-NMR数据见表2。化合物8经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［8］报道的数据基本一致，鉴定化合物为24-O-acetyldahurinol-3-O-β-D-xylopyranoside。
化合物9：白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 663 ［M+H］+ (分子式C37H58O10)。1H-NMR (CDCl3.) δ: 0.45, 0.66 (each 1H, d, J = 3.6 Hz, 19-H), 1.09 (3H, d, J= 6.4 Hz, 21-H), 0.86, 0.86, 0.98, 1.29, 1.33, 1.37 ( each 3H, s, 6×CH3), 2.09（3H, s, Ac）, 2.80（1H, d, J= 8.4 Hz, 24－H）, 3.24 (1H, dd, J= 11.0, 4.0 Hz, 3-H), 3.99 (1H, s, 15-H), 4.95 (1H, br t, J= 8.4 Hz, 23-H), 4.51 (1H, d, J = 7.4 Hz,11′-H)。13C-NMR数据见表2。化合物9经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［9］报道的数据基本一致，鉴定化合物为23-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(23-O-acetylshengmanol-3-O-β-D-xylopyranoside)。
化合物10：白色无定型粉末。1H-NMR ( Pyr.) δ： 0.33, 0.59 (each 1H, d, J= 3.6 Hz, 19-H), 1.28 (3H, d, J= 6.4 Hz, 21-H), 1.08, 1.22, 1.27, 1.34, 1.39, 1.41 ( each 3H, s, 6×CH3), 1.99, 2.07（3H, s, 2×Ac）, 3.05（1H, d, J = 8.4 Hz, 24－H）, 3.50 (1H, dd, J= 11.5, 4.2 Hz, 3-H), 4.38 (1H, s, 15-H), 5.40 (1H, br t, J= 8.4 Hz, 23-H), 4.89 (1H, d, J= 7.5 Hz, 11′-H), 5.42(1H, m, 4′-H )。13C-NMR数据见表2。化合物10经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［10］报道的数据基本一致，鉴定化合物为Cimiracemoside M。
化合物11：白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 579［M+H］+(分子式 C33H48O9 )。1H-NMR ( Pyr ) δ: 0.50, 1.02 (each 1H, d, J= 3.6 Hz, 19-H), 0.98(3H, d, J= 6.3 Hz, 21-H), 1.03, 1.06, 1.28 , 1.34 ( each 3H, s，4×CH3), 2.14 (3H, s, Ac), 2.90 (1H, dd
, J= 16.0, 9.0 Hz, 11-H), 3.44 (1H, dd, J= 11.6, 3.8 Hz, 3-H), 4.85 (1H, d, J= 7.5 Hz, 1′-H), 4.90 (1H, d, J= 7.5 Hz,16-H), 5.12 (1H, d, J=8.7 Hz, 7-H), 5.14 (1H, d, J= 8.7 Hz, 12-H)。13C-NMR数据见表2。化合物11经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［11］报道的数据一致，鉴定化合物为12β-acetoxy-3β-hydroxy-24,25,26,27-tetranor-cycloart-7-en-23,16β-olide-3-O-β-D-xylopyranoide。
化合物12：白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 591 ［M+H］+ (分子式 C33H50O9 )。1H-NMR ( Pyr ) δ: 0.20, 0.56 (each 1H, d, J= 3.9 Hz, 19-H), 0.98(3H, d, J= 6.2 Hz, 21-H), 0.85, 1.02, 1.24 , 1.32 ( each 3H, s, 4×CH3), 2.14 (3H, s, Ac), 2.70(1H, dd, J= 16.0, 9.0 Hz, 11-H), 3.47 (1H, dd, J= 11.6, 3.8 Hz, 3-H), 4.84 (1H, m, 16-H), 4.86 (1H, d, J= 7.5 Hz, 1′-H), 5.07 (1H, dd, J= 3.1, 8.7 Hz, 12-H)。13C-NMR数据见表2。化合物12经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［11］报道的数据基本一致，鉴定化合12b-acetoxy-3β-hydroxy-24,25,26,27-tetranor-cycloartan-23,16β-olide-3-O-β-D-xylopyranoide。
化合物13：白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 679 ［M+H］+(分子式 C37H58O11)。1H-NMR ( Pyr ) δ: 0.23, 0.56 (each 1H, d, J = 3.6 Hz, 19-H), 1.22 (3H, d, J= 6.2 Hz, 21-H), 0.87, 1.02, 1.28, 1.33, 1.71, 1.78( each 3H, s, 6×CH3), 2.09(3H, s, Ac), 2.73（1H, dd, J= 16.0, 9.0 Hz, 11-H）, 3.48(1H, dd, J= 11.2, 4.0 Hz, 3-H), 3.90(1H, d, J= 10.5Hz, 22-H), 4.23(1H, s, 24-H), 4.87 (1H, d, J= 7.5 Hz, 1′-H), 5.00(1H, q-like, J= 8.1Hz, 16-H), 5.16 (1H, dd, J= 3.6, 9.0 Hz, 12-H)。13C-NMR数据见表2。化合物13经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［12］报道的数据基本一致，鉴定化合物为Cimiracemoside H。
化合物14：白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 663 ［M+H］+(分子式 C37H58O10)。1H-NMR ( Pyr ) δ: 0.31, 0.54(d, J= 3.6 Hz, 19-H), 0.99(d, J= 5.7Hz, 21H), 1.08, 1.14, 1.20, 1.27, 1.40, 1.78(3H, s, 6×CH3), 2.10(3H, s, Ac), 3.52(1H,dd, J = 11.7, 4.2Hz, 3-H), 4.84(d, J= 7.4Hz, 1′-H), 5.19(1H, d, J= 7.6Hz, 24-H)。13C-NMR数据见表2。化合物14经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［13］报道的数据基本一致，鉴定化合物为Neocimicigenosides B。
化合物15：白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 667 ［M+Na］+ (分子式 C37H56O9 )。1H-NMR ( Pyr ) δ: 0.37, 0.62(d, 3.6 Hz, 19-H), 0.89(d, J = 6.4Hz, 21-H), 0.80, 0.94, 0.94, 1.09(3H, s, 5×CH3), 2.13(3
H, s, Ac), 4.24(d, J= 8.4Hz, 23H), 4.86, 5.00(each 1H, s,26-H), 4.58(d, J= 5.7Hz, 1′-H)。13C-NMR数据见表2。化合物15经酸水解, TLC Rf值对照，鉴定为D－木糖。以上光谱数据与文献［8］报道的数据基本一致，鉴定化合物为2′-O-乙酰基-25-脱水升麻醇-3-O-β-D-木糖苷( 2′-O-acetyl-25-anhydrocimigenol-3-O-β-D-xylopyranoside)。
表1 化合物1～7的13C-NMR (Pyr)（略）
表2 化合物8～15的13C-NMR（略）
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