作者：张大力， 杨晓方，冯淑华
【摘要】 目的研究麦冬水煎液的指纹图谱及其技术。方法反相高效液相色谱法和指纹图谱的直观比较法研究。结果麦冬水煎液的直接色谱分析会产生较高的色谱曲线背景。将麦冬水煎物经乙醇提取后，色谱曲线的背景可显著降低。试样以乙醇为溶剂时，会导致某些色谱峰的峰形不好。论文论文参考网结论以KH2PO4水溶液为反相色谱法的流动相时，用水作为试样的溶剂较适宜。适当地调整图谱的坐标形式，如采用对数坐标形式或采用两段不同的单位坐标值形式等，可显著改善指纹图谱的质量。
【关键词】 麦冬; 水煎煮液; 反相高效液相色谱; 指纹图谱; 直接比较法; 药物质量控制
Abstract:ObjectiveBecause of Radix ophiopogonis decoction used in various preparations of Chinese traditional medicine, the relevant fingerprint technology of Radix ophiopogonis decoction was approached. MethodsThe direct-vision comparison method was used to research the RP-HPLC fingerprint. ResultsIn the HPLC analysis, Radix ophiopogonis decoction could lead to comparatively high background of chromatogram.After extracting the decoction with ethyl alcohol, the background (base line) of chromatogram was obviously reduced. When using ethyl alcohol as the solvent of the extract, some chromatographic peak shapes became abnormal. ConclusionUsing aqueous solution of KH2PO4 as mobile phase of reverse phase liquid chromatography, water was the suitable solvent to the extract. Changing the form of coordinate axis could observably improve the quality of fingerprint, such as logarithmic coordinate axis or axis break.
Key words:Radix ophiopogonis; Decoction; RP-HPLC; Fingerprint; Direct-vision comparison method; Control of drug quality
具有养阴生津和润肺清心功能的麦冬已被收入“儿康宁糖浆”“川贝雪梨膏”“心通口服液”“龙牡壮骨颗粒”和“补肾益脑片”等许多成方制剂， 在这些制剂的生产中均使用麦冬等药材的水煎煮液［1］。麦冬水煎液的指纹图谱研究是实现以指纹图谱技术控制这些药品质量的基础。鉴于人们对麦冬化学成分及其作用的研究结果，以高效液相色谱法制作麦冬水煎液的指纹图谱是非常适宜的方法。但是，水煎过程中药物所含的各种成分水解溶出，水煎液的组成相当复杂，其中某些物质可能会对测定产生干扰。如糖类，反相色谱柱对其几乎无分离能力，并引起很高的基线背景。色谱检测器对某些物质响应很高而对另外一些物质响应又很低，再伴以各种组分在药物中含量差异巨大，这些均会对指纹图谱的直接比较产生不利影响。有关物质的峰形及峰位是指纹图谱鉴别的重要依据，但有些物质的色谱峰形甚至会受到试样溶剂种类的显著影响。本文探索了有关技术问题的解决。
1 器材
液相色谱仪：岛津-高效液相色谱仪，CLASS-VP LC工作站。色谱柱：Agilent TC-C18 （4.6 mm×250 mm,5 μm）。 紫外检测器，检测波长254 nm。四川麦冬(燕京医药公司)，其它化学试剂均为分析纯。
2 结果与讨论
2.1 麦冬水煎液的指纹图谱取麦冬10 g，加水40 ml, 回流煎煮3 h，滤除麦冬。滤液浓缩至15 ml，再经0.45 μm微 微孔滤膜过滤，即得供试液。麦冬水煎液的高效液相色谱图如图1所示。图1表明，麦冬水煎液的直接高效液相色谱分析会产生较高的色谱曲线背景。
2.2 麦冬水煎-乙醇提取液的指纹图谱取麦冬10 g，加水煎煮3 h，滤除麦冬。煎煮液浓缩至粘稠液体，用乙醇对粘稠物进行两次提取，每次用乙醇20 ml 。合并乙醇提取液，浓缩至15 ml，再经0.45 μm微孔滤膜过滤得供试液。图2为该供试液的高效液相色谱图。供试液中的溶剂为乙醇。糖类等在乙醇中的溶解度较低，图2的背景较图1的情况降低。但实验表明供试液以乙醇为溶剂时，有些色谱峰的峰形不够好，例如图2中10～20 min的色谱峰。
2.3 麦冬水煎-醇提-水溶液试样的图谱取麦冬10 g，加水煎煮3次，时间分别为3 h，2 h和2 h，滤除麦冬。合并煎煮液并浓缩至粘稠液体（放冷后呈固态）。在温热条件下用乙醇对粘稠物进行两次提取，每次用乙醇20 ml 。合并乙醇提取液，蒸除乙醇，加水15 ml溶解，滤除不容物，再经0.45 μm微孔滤膜过滤得供试液。图3为麦冬水煎-醇提-水溶液试样的色谱图。图3中的色谱峰较图1和图2多，应与煎煮次数（或时间）增加对应。《中国药典》中“二冬膏”“川贝雪梨膏”“补肾益脑片”等的制作中共煎煮7 h，图3印证了其必要性。
论文参考网 2.4 麦冬水煎液的稳定性将上述麦冬水煎-醇提-水溶液与麦冬水煎液比?，前者多一个乙醇提取过程，该过程旨在除去难溶于乙醇的糖类物质等。麦冬水煎-醇提-水溶液的稳定性亦可反映麦冬水煎液的稳定性。图4为麦冬水煎-醇提-水溶液在放置了1 d，2 d和6 d后分别测定的结果。图4表明色谱峰的变化不大。麦冬水煎液具有一定的稳定性。
2.5 讨论指纹图谱法鉴别中药的意义所在，已为许多作者所阐述［2，3］。就指纹图谱的色谱法鉴别（事实上主要应为高效液相色谱和气相色谱）而言，在一定意义上鉴别方法可分为指纹图谱软件法［4～6］和直观比较法等［7，8］。指纹图谱软件法具有可量化处理的优势，直观比较法具有简单的便利。指纹图谱软件法应用指纹相似度软件对色谱数据进行处理，得出供试品与对照品的相似百分度，用相似百分度作为判断真伪的主要依据。直观法以色谱图的直观比较作为鉴别真伪的依据。 为了准确地直观比较图谱，图谱的表达形式十分重要，而图谱表达形式的核心之一是坐标轴的问题。中药所含的成分不但复杂而且相对含量差异巨大，另一方面检测器对不同物质的响应灵敏程度也存在巨大差异，这就不可避免地造成图谱中有的峰很大而有的峰很小。当照顾大峰的比较时，图谱中的单位坐标值很大，可能导致小峰无法辨认。有可能小峰代表的物质才是药物的真正有效成分，如将其忽略不计显然不妥。当单位坐标值缩小时，大峰可能已冲出图外，不利于整体比较。虽然此问题可用多图法补救，但在一张图中兼顾大小峰的方法之一是调整坐标轴。图1、图2和图3的纵坐标采用了两段不同的单位坐标值，大峰和小峰均能表示出来。另一种可以尝试的有效方法是用对数坐标。
麦冬水提液中存在大量易溶于水的物质，其中许多与C18化学键合固定相作用很弱，出峰较快，导致十几分钟内密集出峰。由于这些峰过于密集，不便于图谱的准确比较〔图4中（1）〕。但图谱的横坐标轴改为对数坐标表示时，密集的峰被分散开来，而且长保留时间的宽峰变瘦可使图谱显得更均匀〔图4中（2）〕。 用不加磷酸盐的水作为图4实验的流动相，亦有较好的色谱分离效果。用乙醇作麦冬煎煮成分的提取剂，能得到很好的提取效果。减少化学试剂的使用和避免毒性较大试剂的使用有利于环境保护和指纹图谱技术在绿色生产中的开展。 麦冬水煎液蒸发浓缩至近干（粘稠状），然后用乙醇提取其中成分。以乙醇提取液做试样进行高效液相色谱分析，有些色谱峰的峰形变得异常。这可能是作为溶剂的乙醇在C18化学键合固定相上的竞争吸附所致。作为溶剂的乙醇的量远远大于其中的溶质，C18化学键合固定相应对乙醇有一定的吸附力（保留能力），相对而言的超量乙醇与提取组分在固定相发生竞争吸附，结果引起某些色谱峰的峰形异常。用甲醇为试样的溶剂时亦有类似的现象。
3 结论
麦冬水煎液的直接高效液相色谱分析会产生较高的色谱曲线背景。以麦冬水煎-醇提-水溶液做供试液的反相色谱分析效果较好。供试液的溶剂种类会影响色谱峰的峰形。指纹图谱直观比较时，适当地调整图谱的坐标形式，如采用对数坐标形式或采用两段不同的单位坐标值形式等，可显著改善指纹图谱的质量。
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