作者：杨秀芬，廖梅春，杨子明，高倩倩
【摘要】 目的观察二氢杨梅素对戊巴比妥钠致小鼠催眠作用的影响。方法将小鼠随机分为二氢杨梅素125 mg/kg组、250 mg/kg组、500 mg/kg组，西咪替丁组和蒸馏水组，观察二氢杨梅素对戊巴比妥钠致小鼠催眠作用的影响，并考察其对小鼠中枢的直接作用以及多次给二氢杨梅素后致小鼠催眠作用的影响。结果二氢杨梅素各剂量组，西咪替丁组和蒸馏水组比较，能显著延长戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间，缩短潜伏期；二氢杨梅素对小鼠中枢无直接作用。结论二氢杨梅素可延长戊巴比妥钠的作用，作用机理可能与抑制细胞色素P450，抑制戊巴比妥钠的代谢有关。
【关键词】 二氢杨梅素 戊巴比妥钠 催眠作用
Abstract：ObjectiveTo survey the influence of dihydromyricetin ( DMY ) on the hypnotic effects of pentobarbital sodium on mice. MethodsThe mice were randomly divided into DMY 125mg/kg group， DMY 250mg/kg group， DMY 500mg/kg group， Cimetidine group and distilled water group. Effect of drug on mice hypnosis induced by pentobarbital sodium was observed. Effect of drugs on mice central action was also observed. ResultsCompared with the group of distilled water， drugs in the group of DMY 125 mg/kg group， DMY 250 mg/kg group， DMY 500mg/kg group and Cimetidine significantly prolonged the time of falling asleep， shortened the duration of hypnosis induced by pentobarbital sodium in mice respectively. It made clear that dihydromyricetin has not any direct effects on the function of central nervous system. ConclusionDihydromyricetin can increase the effect of Pentobarbital sodium and the mechanism may be related to inhibiting the activity of cytochrome P450 ， decreasing metabolism of pentobarbital sodium.
Key words： Dihydromyricetin; Pentobarbital sodium; Hypnotic effect
二氢杨梅素为（3 ，5 ， 7 ， 3’， 4’， 5’?擦?羟基2， 3双氢黄酮醇，Dihydromyricetin，DMY，见图1），又名蛇葡萄素(Ampelopsin)，是一种重要的黄酮醇化合物， 存在于葡萄科、杨梅科、杜鹃科、藤黄科、大戟科以及柳科等植物中。论文学术科研网在蛇葡萄科植物中大量存在， 其中又以显齿蛇葡萄幼嫩茎叶(民间称“藤茶”)中含量最高(可高达24%~31%)［1~3］。研究表明，二氢杨梅素（蛇葡萄素）在体外可显著抑制人早幼粒白细胞、人鼻咽癌细胞、人乳腺癌细胞的增殖，可抑制黑色素瘤细胞在小鼠体内的生长、侵袭和转移，抑制小肺癌细胞在裸鼠体内的生长［3］。此外二氢杨梅素（蛇葡萄素）还具有消炎、止咳、祛痰、镇痛、抑菌、抗高血压病、降脂、降血糖、护肝、体外抗氧化等作用［1］。而且毒性低［二氢杨梅素小鼠灌胃最大耐受量5 g/kg，腹腔注射半数致死量LD50为(1.41±0.13)g/kg］［1］。但二氢杨梅素对肝内重要的药物（毒物、致癌物）代谢酶细胞色素P450（cytochrome P-450，CYP）影响的研究未见报道。
已发现黄酮类化合物：黄酮化合物（flavone）(apigenin?惭笄鬯兀? baicalein?不栖怂氐?)、黄酮醇（flavonol ）（ myrice
etin?惭蠲匪兀?galangin?哺吡冀?素， kaempferol?采借退兀? quercetin?查纹に氐龋?、双氢黄酮 （flavanone）(naringenin?茶制に氐?)、flavanol (catechin?捕?茶素， epicatechin－表儿茶素等 )，这些黄酮类中的大多数化合物在体外或体内均可不同程度地抑制或诱导CYP1A1，CYP1A2，CYP1B1，CYP3A4(大鼠CYP3A1)中一个或多个成员［4~7］。CYP1A1、CYP1B1主要参与环境污染物如多环芳基化合物（polycyclic aromatic hydrocarbons， PAHs，如:苯并吡， benzo［a］pyrene），杂环胺类（heterocyclin amines， HCAs， 如PhIP ， 2??amino?? 1??methy??6?? phenylimidazo ［4，5~6］pyridine ）等毒物或前致癌物的代谢激活或代谢清除［7，8］。多环芳基化合物黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1)经CYP1A2 和CYP3A4代谢激活可形成黄曲霉毒素B1??8，9?不费趸?物，可诱发肝癌、肺癌等，但黄曲霉毒素B1( aflatoxin B1 )经CYP1A2 和CYP3A4代谢形成的其他化合物又是黄曲霉毒素B1从体内清除的重要途径［7，8］。此外CYP1A2和CYP3A4还是非常重要的药物代谢酶，临床上使用的药物约50％左右经CYP3A4 (大鼠CYP3A1) 代谢。此外，参与药物代谢的CYP还有CYP2C9，CYP2C19，CYP 2D6等［4~8］。
戊巴比妥钠为巴比妥类镇静催眠药，剂量由小到大，依次会出现镇静、催眠、抗惊厥和抗癫痫及麻醉作用。戊巴比妥钠由CYP代谢而失去活性，在体内由CYP介导经过C5 上长链基团氧化和N 上的去甲基化过程，当CYP活性被抑制时，则减缓戊巴比妥钠在肝内的羟化(氧化) 过程， 致戊巴比妥钠在体内代谢转化减慢，血药浓度降低变缓，出现睡眠时间显著延长［9］。参与戊巴比妥钠代谢的CYP主要成员是CYP2C，而CYP2C又包括CYP2C8，CYP2C9，CYP2C10，CYP2C19四个亚型［10］。因此我们采用二氢杨梅素与戊巴比妥钠合用后对小鼠催眠作用的影响，以初步判断二氢杨梅素是否可以通过诱导或抑制细胞色素P450，从而加速或减慢戊巴比妥钠的代谢，进而缩短或延长小鼠的睡眠时间，以间接判断二氢杨梅素是否可以诱导或抑制CYP。
图 1 二氢杨梅素的化学结构与其同类黄酮化合物的结构比较（略）
1 材料
1.1 动物昆明种小鼠，体重20~30 g，雌雄各半。由广西壮族自治区食品药品检验所实验动物中心（合格证号：SCKX桂2003-0001）和广西中医学院实验动物中心提供（合格证号：SYXK桂2003-0001）。
1.2 药品与试剂二氢杨梅素（购自张家界湘汇生物有限公司，批号：070316），西咪替丁（广东台城制药有限公司，批号：20080301），戊巴比妥钠（广东台城制药有限公司，批号：030415），蒸馏水。
2 方法
2.1 一次给予二氢杨梅素后对戊巴比妥钠致小鼠催眠作用的影响［11］将小鼠随机分成4组，每组12或20只。小鼠按125 ，250，500 mg/kg分别灌胃给予二氢杨梅素，阳性药西咪替丁组按300 mg/kg灌胃给药，对照组给等体积蒸馏水，2h后分别腹腔注射25，50mg/kg的戊巴比妥钠，立即观察并记录小鼠潜伏期及睡眠时间。
2.2 二氢杨梅素对小鼠中枢直接作用的影响［12］取小鼠分别轻提其尾，将其置于高60 cm的铁架台顶端，令其头朝下沿杆爬行至地面，将不能顺利爬至地面而掉落的小鼠淘汰。实验分组及给药同上。给药后30，60，90，120，150及180 min时分别重复上述实验。密切观察小鼠给药前后的自主活动和其他中枢活动异常表现，并记录各组不能顺利爬至地面而从杆上掉落的小鼠数。
学术科研网
2.3 潜伏期的测定从注射戊巴比妥钠到小鼠翻正反射消失的时间。
2.4 睡眠期的测定从小鼠翻正反射消失到小鼠醒来的时间。
2.5 睡眠时间变化率的测定给药组与对照组睡眠时间增加与减少的程度。
2.6 统计学方法 数据以±s表示，组间比较进行t检验，数据采用Microsoft Excel统计软件进行分析处理。
3 结果
3.1 一次给予二氢杨梅素后对戊巴比妥钠致小鼠催眠作用的影响从表1中可以看出，当给小鼠腹腔 注射戊巴比妥钠25 mg/kg时，给药组与对照组比较其潜伏期与睡眠时间都无明显差异，P>0.05；阳性药西咪替丁组与对照组比较其睡眠时间延长有非常显著性差异，P<0.01，潜伏期无明显差异，P>0.05。当给小鼠腹腔注射戊巴比妥钠50 mg/kg时，二氢杨梅素125 mg/kg组、250 mg/kg组、500 mg/kg组与对照组比较其睡眠时间延长，有显著性差异，P<0.05；二氢杨梅素250 mg/kg组、500 mg/kg组与对照组比较其潜伏期缩短，有非常显著性差异，P<0.01。
表1 一次给予二氢杨梅素后对戊巴比妥钠致小鼠催眠作用的影响（略）
与对照组比较，*P>0.05; **P<0.05; ***P<0.01
3.2 二氢杨梅素对小鼠中枢直接作用的影响给药前及给药后，小鼠自主活动无差异，都没有出现烦躁不安、镇静嗜睡、步履不稳、摇摇晃晃等异常现象，都能顺利从竿顶爬至地面，不能顺利爬至地面而从杆上掉落的小鼠数各时段均为0。结果见表2。
表2 二氢杨梅素对小鼠中枢直接作用的影响（略）
4 讨论
戊巴比妥钠主要由细胞色素P450（Cytochrome P450， CYP） 代谢而灭活，少量以药物原形经肾排泄，故睡眠时间的长短反映了戊巴比妥钠在体内代谢速度的慢或快，对其催眠作用的影响可以间接反映药物对CYP的影响。但是药物的中枢抑制或兴奋作用也可能延长或缩短戊巴比妥钠的睡眠时间。由表1 可知二氢杨梅素能使戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间显著延长，可能是二氢杨梅素对小鼠CYP抑制的结果，而不是中枢作用。由表2可知给药前及给药后，小鼠活动状态没有明显变化并且全部能顺利从杆顶爬至地面，表明药物对小鼠中枢的直接作用没有影响，没有镇静催眠的效果，说明二氢杨梅素能显著延长戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的原因确实是抑制CYP。西咪替丁是典型的CYP抑制剂，二氢杨梅素虽然对 CYP有抑制作用，但从表1中可以得出其效果不如西咪替丁。
由实验结果可知，二氢杨梅素能使戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间显著延长，是细胞色素P450的抑制剂，对小鼠中枢的直接作用没有影响，没有镇静催眠的效果。
【参考文献】
［1］ 张有胜，宁正祥， 胡闫勇. 黄酮类化合物二氢杨梅素的研究利用现状［J］. 中成药， 2002， 24: 970.
［2］ 王 岩，周莉玲， 李 锐，等. 显齿蛇葡萄化学成分的研究［J］. 中药材， 2002， 25: 254.
［3］ 刘德育， 罗 曼， 谢冰芬，等. 蛇葡萄素的抗肿瘤作用研究［J］. 癌症，2001， 20: 1372.
［4］ 杨秀芬，王乃平， 曾繁典. 中药有效成分对药物代谢酶的影响［J］. 中国中药杂志， 2002， 27: 325.
［5］ Yang XF，Wang NP， Lu WH， et al. Effects of Ginkgo biloba extract and tanshinone on cytochrome P-450 isozymes and glutathione transferase in rats［J］. Acta Pharmacol Sin， 2003， 24: 1033.
［6］ 杨秀芬， 王乃平， 曾繁典. 银杏内酯对大鼠肝细胞色素P450基因表达的影响［J］. 中国中药杂志， 2005，30: 1009.
［7］ Yang XF， Wang NP，Zeng FD. Tobacco-smoking-related factors， cytochrome P-450 polymorphisms， cytochrome P-450 inhibitors and lung cancer. Asian Journal of Pharmacodynamics and Pharmacokinetics［J］. Asian Journal of Pharmacodynamics and Pharmacokinetics. 2007，7(1): 49.
［8］ Yang XF， Wang NP. Small interfering RNA and miRNA: Are cytochrome P-450 their targets［J］. Asian Journal of Pharmacodynamics and Pharmacokinetics，2008， 8(1): 31.
［9］ 叶少梅，黄天来，欧卫平，等. 补骨脂内酯 对戊巴比妥钠及巴比妥钠所致小鼠睡眠时间的影响［J］. 新中医，1998， 30(10): 39.
［10］ 徐月萍. 细胞色素P450酶系与药物代谢的相互作用［J］. 中国药物与临床， 2003， 3(2): 141.
［11］ 李焕冰，钟 文，李铁军，等. 灯盏细辛和灯盏花素对戊巴比妥钠致小鼠催眠的影响［J］. 药学实践杂志， 2007，25（2）:85.
［12］ 曹 曦，明 亮，李 静，等. 冬虫夏草发酵液的镇静催眠作用［J］. 安徽医科大学学报，2005，40（4）：314.
http://m.tuzhexing.com/kaoshi/1237134/